Wewnętrzna walidacja metody kwantyfikacji dna z wykorzystaniem zestawu Quantifiler® Human DNA Quantification Kit i aparatu 7500 Real-Time PCR System wraz z oprogramowaniem Hid Real-Time PCR Analysis Software V 1.1 w Zakładzie Biologii Centralnego Laboratorium Kryminalistycznego Policji

• Authors: Renata dr Zbieć-Piekarska , Anna Spas

Title variants

EN

INTERNAL VALIDATION OF A DNA QUANTIFICATION METHOD using the Quantifiler® Human DNA Quantification Kit and the 7500 REAL-TIME PCR SYSTEM with the HID REAL-TIME PCR ANALYSIS SOFTWARE V 1.1 at the Biology Department of the Central Forensic Laboratory of the Police

• Languages of publication: PL EN

Abstracts

PL

Celem przedstawionych badań było przeprowadzenie w Zakładzie Biologii Centralnego Laboratorium Kryminalistycznego Policji walidacji wewnętrznej metody kwantyfikacji DNA z wykorzystaniem zestawu Quantifiler® Human DNA Quantification Kit firmy Applied Biosystems, służącego do oznaczania całkowitej ilości DNA ludzkiego przy współpracy z aparatem 7500 Real-Time PCR System wraz z oprogramowaniem HID Real-Time PCR Analysis Software v1.1. Wyboru parametrów istotnych z punktu widzenia rutynowo prowadzonych badań dokonano na podstawie zaleceń grupy roboczej ds DNA ENFSI tj. Recommended Minimum Criteria of the Valiation of Various Aspects of the DNA Profiling Process. Ocenie poddano: czułość, liniowość, zakres metody oraz precyzję z uwzględnieniem powtarzalności i odtwarzalności wewnątrzlaboratoryjnej. Dodatkowo podjęto próbę ustalenia, czy zasadna jest kontynuacja analiz genetycznych, jeżeli wskazania aparatu 7500 Real-Time dają wynik negatywny, tj. nie wykazały obecności DNA jądrowego przy jednoczesnych prawidłowych wskazaniach dla kontroli wewnętrznej IPC. Na podstawie przeprowadzonych eksperymentów walidacyjnych stwierdzono, że zakres, w jakim walidowana metoda spełniła zadane wcześniej kryteria akceptacji, jest satysfakcjonujący, biorąc pod uwagę specyfikę badań wykonywanych w naszym laboratorium. Niemniej bardzo uważnie należy interpretować negatywne wskazania aparatu 7500 Real-Time PCR System, sugerujące brak obecności DNA jądrowego przy jednoczesnych prawidłowych wskazaniach dla kontroli wewnętrznej IPC. Okazuje się bowiem, że nie jest zasadne odstępowanie od dalszej analizy tego rodzaju próbek z uwagi na możliwość zastosowania nowych bardzo czułych zestawów do amplifikacji DNA, które niejednokrotnie pozwalają na uzyskanie pełnego profilu DNA. Podsumowując, walidacja metody kwantyfikacji DNA z wykorzystaniem zestawu Quantifiler® Human DNA Quantification Kit i aparatu 7500 Real-Time PCR System wraz z oprogramowaniem HID REAL-TIME PCR Analysis Software V1.1 została zakończona pozytywnie, w związku z czym metoda mogła zostać wdrożona i być rutynowo wykorzystywana do oznaczania całkowitej ilości DNA ludzkiego w próbkach biologicznych będących przedmiotem badań kryminalistycznych w Zakładzie Biologii CLKP.

EN

The aim of the present study was the internal validation of a DNA quantification method employing the Quantifiler® Human DNA Quantification Kit from Applied Biosystems, used for the quantification of human total DNA, coupled with the 7500 Real-Time PCR System and the HID Real-Time PCR Analysis Software v1.1, performed at the Biology Department of the Central Forensic Laboratory of the Police. The selection of parameters relevant to the laboratory’s routine casework was made based on the ENFSI DNA Working Group recommendations included in the document Recommended Minimum Criteria for the Validation of Various Aspects of the DNA Profiling Process. The assessment regarded: sensitivity, linearity, range covered by the method and precision, including intralaboratory repeatability and reproducibility. Moreover, an attempt was made to determine whether continuation of genetic analyses is rational if the 7500 Real-Time system reads are negative, i.e. no nuclear DNA is detected, while the internal positive control (IPC) results are correct. Based on the conducted validation experiments, it was found that the extent to which the validated method met the predetermined acceptance criteria is satisfactory, taking into account the specificity of the tests conducted in our laboratory. However, any negative indications of the 7500 Real-Time PCR System, suggesting no presence of nuclear DNA along with correct results obtained for the IPC, should be interpreted very carefully. Apparently, it is not rational to discontinue further analyses of such samples due to the availability of very sensitive new DNA amplification kits which often allow obtaining a full DNA profile. To sum up, the validation of the DNA quantification method employing the Quantifiler® Human DNA Quantification Kit coupled with the 7500 Real-Time PCR System and the HID REAL-TIME PCR Analysis Software V1.1 was successful, therefore the method could be implemented and routinely used for the quantification of human total DNA in biological samples subject to forensic analyses conducted at the Biology Department of the Central Forensic Laboratory of the Police.

Keywords

PL

walidacja; kwantyfikacja DNA; Real-Time PCR; Quantifiler® Human DNA Quantification Kit

EN

internal validation; quantification of DNA; Real-Time PCR; Quantifiler® Human DNA Quantification Kit

• Publisher: Centralne Laboratorium Kryminalistyczne Policji
• Journal: Problemy Kryminalistyki
• Year: 2014
• Issue: 284

Contributors

author

Renata dr Zbieć-Piekarska

• Wydział Rozwoju Naukowego CLKP

author

Anna Spas

• Zakład Biologii CLKP